Western blot

تقنية مستخدمة في الكشف عن البروتينات. قد يحصل في أثناء إجراء التجربة التعرض لمشاكل عده منها: (1) ظهور (bands) باند غير عادية أو غير متوقعة ،(2) لا وجود للباند ،(3) باند باهت أو ضعيف، (4) خلفية ملطخه و (5) باند وبقع غير منتظمة أو غير متساوية??

هُنا راح أذكر عن تجربة شخصية بعض النقاط التي تساعد باذن الله في تفادى حدوث كل ماسبق ✨??

:

#مختبرات_طبية #علوم #Western #proteins https://t.co/1FV8rD8d8D

?لابد من أن تكن العينه المستخدمة جديده (fresh sample) وذلك بسبب حساسية البروتين للعوامل الخارجية.

?عند إستخلاص البروتين يُنصح باستخدام protease inhibitors-

phosphatase inhibitors for phospho-targets

?الحرص على أن يكون تحضير العينة داخل ثلج لتجنب تحلل البروتين

?الحرص على إستخدام high quality nitrocellulose membrane وذلك بسبب أن جودة بعض nitrocellulose membrane تكن غير مناسبة للبروتينات صغيرة الحجم

?عند خطوة transfer membrane أو نقل البروتين لفلتر بيبر يُفضل بأن يكن transfer buffer 10x محضر مسبقًا ومحفوظ في مكان بارد لتفادى التحلل اثناء عمل جهاز gel electrophoresis او بوضع قالب من الثلج أثناء تشغيل الجهاز ولكن على صعيد شخصي أفضل النقطة الاولى.